Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, cytométrie CD55/CD59

À quoi sert cet examen

La cytométrie en flux du sang périphérique est la méthode de référence pour identifier et quantifier les cellules déficientes en protéines ancrées au glycosylphosphatidylinositol (GPI), anomalie caractéristique de l’HPN. CD55 et CD59 font partie des marqueurs utilisés; FLAER et d’autres marqueurs de lignée peuvent compléter le panel. [s1,s2,s3,s6]

• L’examen est indiqué notamment devant une hémolyse intravasculaire ou une anémie hémolytique inexpliquée, en présence de cytopénies ou de signes de défaillance médullaire, et lors de thromboses inexpliquées, particulièrement en localisation inhabituelle. [s2,s3,s4,s5]
• Une déficience GPI démontrée dans plusieurs lignées sanguines, avec plusieurs marqueurs adaptés, étaye la présence d’un clone HPN; l’examen s’inscrit dans l’évaluation clinique et biologique et ne constitue pas à lui seul un diagnostic individuel. [s2,s3,s4]
• Le spécimen décrit dans les recommandations est le sang périphérique anticoagulé; le laboratoire doit préciser tube, délai et conditions d’acheminement selon sa méthode validée. [s3]

Valeurs de référence

Résultat qualitatif attendu : absence de population déficiente en protéines GPI dans les populations analysées en l’absence de clone détectable; un clone HPN est compatible avec une population cellulaire à expression diminuée (type II) ou absente (type III) de marqueurs GPI. Le compte rendu doit indiquer les lignées et marqueurs testés ainsi que la présence ou l’absence de clone. [s1,s2,s3]

Seuils de décision et gravité

Aucun seuil universel de positivité ou intervalle de référence chiffré n’est proposé ici : la sensibilité de détection et de quantification dépend du panel, de la méthode et du laboratoire exécutant. Celui-ci fait foi pour les limites analytiques et l’interprétation du résultat. [s1,s3,s6]

Interprétation

Un résultat sans clone détectable signifie qu’aucune population déficiente n’a été détectée par le panel et la sensibilité utilisés; il n’exclut pas une population sous la limite de détection de la méthode. [s1,s6]

L’expression diminuée ou absente de protéines ancrées au GPI sur une population de cellules sanguines est compatible avec un clone HPN; l’absence complète correspond au phénotype de type III et la déficience partielle au type II. La conclusion s’appuie sur plusieurs marqueurs et lignées afin d’éviter de confondre un déficit isolé d’un antigène avec un clone HPN. [s1,s2,s3,s4]

Facteurs qui faussent le résultat

• L’analyse des seuls globules rouges n’est pas recommandée pour établir ou quantifier le clone : l’hémolyse peut réduire leur proportion et une transfusion peut diluer la population déficiente avec des globules rouges transfusés normaux. [s1,s2,s3]
• Les granulocytes et monocytes sont généralement privilégiés pour apprécier le clone; la cytométrie emploie des marqueurs de lignée en plus des marqueurs GPI, et FLAER peut améliorer la détection de petites populations leucocytaires. [s1,s3,s6]
• Les expressions antigéniques altérées dans certaines situations, notamment syndromes myélodysplasiques, inflammation systémique ou après greffe, peuvent compliquer l’interprétation de marqueurs GPI conventionnels; le panel et les contrôles doivent suivre une procédure validée. [s1,s6]
• Le type d’anticoagulant et le délai de traitement influent sur la qualité du spécimen; les recommandations rapportent du sang périphérique anticoagulé et préconisent une analyse aussi rapidement que possible, selon la procédure du laboratoire. [s3]

Sources

1. Brando B; et al.. Flow Cytometric Diagnosis of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria: Pearls and Pitfalls (2019)
2. Manivannan P; et al.. Diagnosis of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria (2017)
3. Sahin F; et al.. Pesg PNH diagnosis, follow-up and treatment guidelines (2016)
4. Parker C; Omine M; Richards S; et al.. Diagnosis and management of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (2005)
5. Ribeiro L; et al.. Consensus statement for diagnosis and treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (2021)
6. Battiwalla M; Hepgur M; Pan D; McCarthy PL; Ahluwalia MS. Multiparameter Flow Cytometry for the Diagnosis and Monitoring of Small GPI-Deficient Cellular Populations (2010)