Recherche de toxine cholérique

À quoi sert cet examen

La recherche est demandée lorsqu’une infection à Vibrio cholerae toxigène est envisagée, notamment dans le contexte d’une diarrhée aqueuse aiguë ou d’une investigation d’épidémie [s4].

Les tests rapides sur selles peuvent contribuer à la détection d’une flambée et à la surveillance, mais ils ne fournissent pas d’isolat pour la détection de la toxine, l’étude de la sensibilité aux antimicrobiens ou le sous-typage; une culture de confirmation doit être réalisée lorsqu’une infection est possible [s4].

La confirmation de laboratoire peut associer l’isolement et l’identification de Vibrio cholerae toxigène, la sérogroupage O1/O139 et une méthode moléculaire; l’Organisation mondiale de la Santé indique que les tests rapides doivent être confirmés par culture, séro-agglutination ou PCR [s1,s4].

Les méthodes publiées ne mesurent pas toutes la même cible: certaines recherchent directement la toxine par immunologie, tandis que d’autres détectent des gènes de toxine comme ctxA ou ctxB [s5,s6,s7].

Valeurs de référence

Résultat qualitatif attendu: non détecté / négatif lorsque la cible recherchée n’est pas mise en évidence; le compte rendu doit préciser la cible et la méthode utilisées [s4,s5,s8].

Interprétation

Un résultat non détecté signifie que la cible définie par la méthode n’a pas été mise en évidence dans le prélèvement analysé; il ne permet pas à lui seul d’exclure une infection si le prélèvement, le transport ou la méthode sont inadéquats [s2,s4,s5].

Pour une PCR appliquée directement aux selles, des inhibiteurs du prélèvement peuvent affecter la réaction; une étude a rapporté qu’une dilution au 1/100 prévenait l’inhibition dans les conditions de son essai [s5].

Un résultat détecté ou positif est compatible avec la présence de la cible recherchée, mais son interprétation dépend de cette cible: détection de toxine, détection d’un gène de toxine ou détection d’un antigène de Vibrio cholerae ne sont pas des résultats interchangeables [s4,s5,s8].

Dans une étude de PCR triplex sur 174 selles enrichies artificiellement, l’essai ciblant notamment ctxA a été rapporté comme sensible et spécifique à 100 % dans les conditions de cette étude; cette performance ne constitue pas une valeur de référence générale pour tous les laboratoires ou tous les prélèvements [s6].

Facteurs qui faussent le résultat

Prélèvement: recueillir des selles dans un récipient propre, sans résidu de désinfectant ou de détergent, ou utiliser un écouvillon rectal; les selles doivent être recueillies précocement au cours de la maladie et avant une antibiothérapie lorsque cela est possible [s2].

Transport: le milieu Cary-Blair est recommandé pour Vibrio cholerae; le sérum salé tamponné au glycérol est déconseillé pour cette bactérie [s2].

Conservation: si le laboratoire reçoit le prélèvement dans les 48 heures, le document CDC recommande une réfrigération à 4 °C; au-delà, il recommande une congélation à −70 °C. Les selles non conservées doivent idéalement être traitées dans les 2 heures ou placées immédiatement dans un milieu de transport et réfrigérées [s2].

Méthode et cible: les tests immunologiques et moléculaires ont des performances et des délais différents; dans l’étude de Varela et collaborateurs, le test VET-RPLA était décrit comme peu sensible et le GM1-ELISA nécessitait 2 à 3 jours, tandis que la PCR permettait une détection en quelques heures dans les conditions étudiées [s5].

Culture: l’isolement est favorisé par un enrichissement dans l’eau peptonée alcaline et un ensemencement sur gélose TCBS; le CDC indique que l’eau peptonée alcaline peut accroître la récupération quand peu d’organismes sont présents et que la gélose TCBS est le milieu sélectif de choix [s3].

Interprétation analytique: un résultat d’antigène O1/O139 obtenu par test rapide ne fournit pas un isolat et ne permet donc pas, à lui seul, la détection de la toxine, l’antibiogramme ou le sous-typage [s4].

Sources

1. World Health Organization. Cholera (2024)
2. Centers for Disease Control and Prevention. Chapter 2: Collection and Transport of Fecal Specimens (2024)
3. Centers for Disease Control and Prevention. Chapter 6: Isolation and Identification of Vibrio cholerae Serogroups O1 and O139 (2024)
4. Centers for Disease Control and Prevention. Cholera (2024)
5. Varela P, Pollevick GD, Rivas M, et al.. Direct detection of Vibrio cholerae in stool samples (1994)
6. Chua AL, Tan HE, Lim BH, et al.. Development of a dry reagent-based triplex PCR for the detection of toxigenic and non-toxigenic Vibrio cholerae (2011)
7. Khuntia HK, Pal BB, Chhotray GP, et al.. Quadruplex PCR for Simultaneous Detection of Serotype, Biotype, Toxigenic Potential, and Central Regulating Factor of Vibrio cholerae (2008)
8. Nato F, Boutonnier A, Rajerison M, et al.. One-Step Immunochromatographic Dipstick Tests for Rapid Detection of Vibrio cholerae O1 and O139 in Stool Samples (2003)