Test EMA pour sphérocytose

Examen biologique : Hématologie. Le test EMA mesure par cytométrie en flux la fluorescence de globules rouges marqués par l’éosine-5′-maléimide, qui se lie notamment à la protéine membranaire band 3. Une diminution de fluorescence par rapport aux témoins peut soutenir le dépistage d’une sphérocytose héréditaire, mais le seuil et la présentation des résultats dépendent de la méthode et du laboratoire; l’examen s’interprète avec les données cliniques et morphologiques.

À quoi sert cet examen

Le test EMA est un examen de cytométrie en flux qui compare la fluorescence des globules rouges marqués au colorant EMA à celle de témoins; la fluorescence reflète notamment les protéines membranaires ciblées par le colorant, dont band 3. [s1,s2]

La recommandation de la British Society for Haematology reconnaît la validation de la valeur diagnostique du test EMA tout en soulignant la nécessité de tenir compte de ses limites. [s6]

Il est utilisé comme test de dépistage et d’appui diagnostique de la sphérocytose héréditaire, en complément de l’histoire familiale et de la morphologie des globules rouges. [s2,s3,s4]
La demande peut s’inscrire dans l’exploration d’une anémie hémolytique ou de sphérocytes au frottis; le résultat seul ne détermine pas le défaut moléculaire et doit être corrélé au contexte. [s1,s2,s4]
Le prélèvement usuel est du sang périphérique recueilli sur EDTA; les conditions de quantité, transport et délai varient selon les protocoles du laboratoire exécutant. [s1,s5]

Valeurs de référence

Il n’existe pas de seuil numérique universel à appliquer entre laboratoires: les résultats et témoins doivent être interprétés selon la méthode et les intervalles établis par le laboratoire exécutant. [s2,s3,s5]

Résultat attendu: une fluorescence des hématies du patient diminuée par rapport aux témoins normaux peut soutenir une anomalie de membrane compatible avec une sphérocytose héréditaire; le compte rendu doit suivre le seuil validé par le laboratoire et le résultat n’est pas à lui seul diagnostique. [s1,s2,s3]

Interprétation

Une fluorescence comparable aux témoins rend le test non évocateur selon les seuils locaux, mais un résultat non abaissé n’exclut pas absolument une sphérocytose héréditaire lorsque la suspicion clinique persiste; un examen de seconde ligne peut alors être nécessaire. [s3,s4]

Une diminution de la fluorescence EMA par rapport aux globules rouges témoins est le profil attendu lorsque la liaison du colorant est réduite; elle soutient la présence d’une anomalie de membrane, sans être spécifique à elle seule de la sphérocytose héréditaire. [s1,s2,s3]

Une fluorescence réduite peut également être observée dans d’autres anomalies héréditaires de la membrane érythrocytaire, notamment l’elliptocytose héréditaire, l’ovalocytose d’Asie du Sud-Est et la pyropoïkilocytose héréditaire. [s2]

Facteurs qui faussent le résultat

Les recommandations techniques préconisent le sang périphérique sur EDTA; un échantillon prétransfusionnel est préférable lorsque cela est possible, car les globules rouges transfusés peuvent compliquer l’interprétation. [s5]
Le délai et les conditions de conservation sont spécifiques du protocole: un guide recommande le maintien à 4 °C et l’analyse dans les quatre jours, tandis que le laboratoire SickKids demande un prélèvement frais analysé dans les 24 heures à température ambiante. Suivre les instructions du laboratoire qui réalise l’examen. [s5]
L’hémolyse du prélèvement ou sa survenue pendant le stockage peut réduire la population cellulaire d’intérêt et favoriser un résultat faussement négatif; signaler l’état de l’échantillon et tout antécédent transfusionnel pertinent. [s5]
L’EMA est sensible à la température et à la conservation du réactif; les différences de cytomètres et d’échelles de fluorescence, ainsi que l’absence de seuil commun, limitent la comparaison directe entre laboratoires. [s2,s5]
Le choix de témoins comparables en volume globulaire moyen peut limiter les erreurs d’interprétation associées à la macrocytose ou à la microcytose. [s2]

Sources

Prashant S. Chari; Arvind S. M. Khanduri; Shubham Sharma; et al.. Flow Cytometric Eosin-5′-Maleimide Test is a Sensitive and Rapid Diagnostic Test for Hereditary Spherocytosis (2018)
Olga Ciepiela. Old and new insights into the diagnosis of hereditary spherocytosis (2018)
Paola Bianchi; Elisa Fermo; Claudia Vercellati; et al.. Diagnostic power of laboratory tests for hereditary spherocytosis: a comparison study in 150 patients grouped according to molecular and clinical characteristics (2012)
Cécile Mayeur-Rousse; et al.. Testing for hereditary spherocytosis: a French experience (2012)
Australasian Cytometry Society. ACS Guideline for Staining for Abnormalities in Red Cell Membranes Using Eosin-5-Maleimide (2019)
British Society for Haematology; P. H. Bolton-Maggs; J. C. Langer; A. Iolascon; et al.. Diagnosis and management of hereditary spherocytosis (2012)